协议和表格

对于已批准的协议，可以使用 协议表格变更.  对现有协议的微小更改可能包括但不限于:

• 增加共同调查员或其他调查员
• 在动物身上进行的手术的持续时间、频率或数量的微小变化
• 小手术或程序的增加
• 需要重复经过批准的实验
• 在某一特定实验中所需动物数量增加≤10%
• 添加一种经批准的动物的不同品系或性别
• 改变动物住房(但仍在标准方法内)
• 实验处理化合物的变化
• 替换合格的学生/技术人员或增加调查合作(不包括首席研究员的变化)

重大变更需要提交新的协议进行审查和批准. 最终决定是轻微还是重大的变化将由IACUC作出，并可能遵循全体委员会或指定成员的审查程序. 对现有协议的重大变更可能包括但不限于:

• 更换主要研究人员
• 研究目标的改变
• 在动物身上进行的手术的持续时间、频率或数量上的显著变化
• 对动物的伤害程度或不适程度的增加
• 从无法存活手术变为存活手术
• Increase in animal numbers >10%
• 物种的变化或增加
• 更换麻醉药或镇痛药
• 改变安乐死的方法或手段
• 人道终点标准的改变
• 将动物饲养、照料和/或喂养方式改为非标准方式
• 添加有害化学或生物制剂

用于或打算用于研究的任何活的脊椎动物, 科研训练, 实验, 测试的:测试或用于相关目的的. 这包括:

1. 处于妊娠期50%或以上的任何非人类脊椎哺乳动物;
2. All larval stages of fish and amphibians, but excludes their embryonated eggs; and
3. 鸟类和爬行动物在其妊娠期的75%或以上的可存活的胚胎蛋.

美国农业部AWA条例规定，一个机构用于研究和教学的动物数量必须每年向美国农业部报告. 这些动物必须按物种划分为美国农业部四个疼痛/痛苦类别之一. 帮助收集准确的信息, 调查人员必须使用相同的系统对请求的动物进行分类.

要正确地做这件事, 你必须了解动物是如何被分配到美国农业部的四种疼痛/痛苦类别的. 类别标签(B到E)来自美国农业部年度报告表格上使用的列标签. 这些类别将按照从没有疼痛/痛苦(B)到大多数疼痛/痛苦(E)的顺序进行讨论。.

对动物进行痛苦或痛苦的过程有一个简单而有用的定义, 这是一种会给人带来疼痛或痛苦的手术."

重要的是要明白，如果要在动物身上进行多次手术, 动物被放置在适合最痛苦/痛苦的程序的类别中. 一种动物不能被归入多个类别.

B类 动物是那些被“饲养”的动物, 条件, 或用于教学, 测试, 实验, 研究, 或外科手术，但尚未用于此目的.“这些动物没有被用于任何研究程序，无论多么小. B类是放置育种者和其他没有进行任何实验程序的动物的地方.

C类 动物不会受到涉及疼痛或痛苦或需要使用止痛药的程序的影响. 常规程序，如注射和静脉采血，只产生轻微, 短暂的疼痛或不适属于这一类. C类程序的另一个例子是对动物行为的观察性研究. 被安乐死的动物 之前 组织收集或其他操作通常也属于这一类, 如果没有其他手术需要进行，则将其置于更高的疼痛/痛苦类别.

类别维 动物是那些遭受潜在痛苦的过程，麻醉, 止痛剂, 或者使用镇静剂. 重要的概念是给予动物适当的麻醉和/或镇痛，以尽可能地限制它们的疼痛和痛苦.

D类程序的例子如下:

• 手术在适当的麻醉和术后镇痛下进行.
• 麻醉下进行啮齿动物眶后眼出血.
• 在麻醉下进行的灵长类动物纹身.
• 在局部或全身麻醉下切除小肿瘤.
• 在动物皮肤暴露在紫外线下造成“晒伤”后使用止痛药。
• 在麻醉下的最终放血(通过放血的安乐死).

E级 动物是那些在没有使用麻醉剂的情况下遭受痛苦或压力的过程的动物, 止痛剂, 或镇静剂. 停止使用麻醉药, 止痛剂, 只有在科学的书面证明和IACUC的批准下，镇静剂才能被允许使用. E类程序的例子是致死剂量研究(E).g., LD50研究)允许动物在没有干预的情况下死亡, 如果使用止痛药，就不可能进行疼痛研究, 心理条件反射实验涉及痛苦刺激，如动物无法立即避免的有害电击.

IACUCs对E类研究进行了更多的审查，因为他们必须满足于没有更少痛苦或压力的替代方案, 或者不那么痛苦/压力的终点不能合理地使用. 由法律规定, 该机构必须每年向美国农业部报告所有E类程序，并包括支持IACUC批准其决定的科学理由. 经常, 研究人员就提交给IACUC的动物表格给出的理由用于年度报告.

关于E类程序的资料必须完整和准确. 一旦提交给美国农业部, 这些信息可能会通过《博彩平台大全》的要求向公众开放.

Background

美国农业部政策#3(兽医护理)关于在涉及活体脊椎动物的研究中使用非药物级化合物的规定如下:

只要有药物，调查人员就应该使用药物级别的药物, 即使在急性手术中. 非药用级化合物只有在经过IACUC的具体审查和批准后才能用于受管制的动物，原因包括科学必要性或无法获得可接受的兽用或人用药用级产品. 节省成本并不是在受管制动物中使用非药物级化合物的理由.

实验动物的护理和使用指南(指南，第8版).)在涉及活体脊椎动物的研究中使用非药物级化合物的情况如下:

使用制药级化学品和其他物质确保在实验动物进行的研究中不会引入有毒或不想要的副作用. 因此，在可能的情况下，它们应用于所有与动物有关的程序. The use of nonpharmaceutical-grade chemicals or substances should be described and justified in the animal care and use protocol and be approved by the IACUC; for example, 为了实现项目的科学目标，或者在无法获得兽药或人用药级产品时，可能需要使用非药用级化学物质或物质. 在这种情况下, 应该考虑到成绩, 纯度, 不育, pH, pyrogenicity, 同渗重摩, 稳定, 管理地点和路线, 配方, 兼容性, 以及要使用的化学物质的药代动力学, 以及动物福利和有关其使用的科学问题.

IACUC注意事项

在审查涉及非药物级化合物的动物护理和使用方案时, 应考虑以下因素:

1. 替代品:是否有任何合适的药物级替代品的化合物?
2. 安全性:该化合物在拟议的程序中使用是否安全?
3. 功效:所建议的化合物是否会对所使用的动物产生预期的或预期的效果?
4. 副作用:该化合物是否会在其拟用于的研究活动中引入复杂的变量?
5. 制剂:该化合物是否按照明确描述的合成方法在无菌条件下制备? 是否要制备该化合物的原液和工作液? 如果有，每一种的浓度是多少，它们是否适合预期用途?
6. 给药:给药方法和途径是否合适?
7. 储存:化合物是否在适当的条件下存放在安全的地方.g.(温度、光线等)?
8. 处理:是否会按照联邦法律的规定处理该化合物和使用该化合物的动物, 状态, 和/或有关处置生物危险或化学危险废物的地方法规?

尽管在非生存研究中，使用非药物级化合物引起的并发症对动物福利的潜在影响不太明显, 科学问题仍然是一样的, 以上所述的原则和职业判断的需要仍然适用.

非药物级化合物的使用必须在动物护理和使用方案中进行彻底和科学的描述，并得到IACUC的批准. 在生存研究中使用的任何此类化合物都必须是无菌的, 保存在无菌容器中, 标签上写着

1. 化合物的名称和浓度
2. 制作日期
3. 使用该化合物的动物护理和使用方案上的主要研究者名称
4. 截止日期

首席研究员, 谘询主治兽医, 由谁负责确定化合物溶解于溶剂后的“保质期”. 如果保质期不能确定, 建议每天准备一种新鲜的化合物溶液，以便使用它. 化合物必须按照大学的程序和适当的时间框架妥善处理，由保质期决定.

TBE是一种用于啮齿类动物的可注射麻醉剂. 它曾经被Winthrop实验室专门制造用作麻醉剂，商品名为Avertin, 但这种产品已不再在市场上销售. 希望使用TBE作为麻醉剂的研究人员必须使用非药用级化学品自行配制溶液.

请注意，除非研究人员在动物护理和使用方案中描述了这种麻醉剂，否则不得使用, 为使用这种麻醉剂而不是药用级麻醉剂提供科学依据, 并获得了IACUC的使用许可. 参见非药物级化合物在活体脊椎动物研究中的应用.

使用

TBE适用于涉及实验室啮齿类动物的短期手术，特别是外科手术. 最好是在只给特定动物注射一次的情况下使用. 在动物身上反复使用TBE可能会增加发病率和死亡率^1,2.

TBE的缺点

• TBE是一种刺激物，特别是在高剂量、高浓度或反复使用时. 腹腔注射后有时会出现粘连^3,4.
• be在热或光的作用下降解，产生有毒的副产物. 降解的溶液可能同时具有肾毒性和肝毒性. 使用降解的TBE溶液与死亡有关，通常发生在手术后24小时^3,5.
• TBE可在注射后数周引起肠梗阻(肠道运动减慢，随后导致动物死亡). 当be储存在光或热的存在下时，这种情况更常见, 储存浓度高于推荐剂量, 或使用浓度高于推荐值^3,6,7.

化学物质

生产TBE溶液需要两种化学物质.

• 2, 2, 2-tribromoethanol
• 水合丙烯(叔戊醇).

复合¹

• 成分
• 5g 2,2,2-三溴乙醇
• 5 mL 2-甲基-2-丁醇(水合丙烯，叔戊醇)
• 200毫升蒸馏水-中性pH值
• 指令
• 溶解2.5克三溴乙醇溶于5毫升水合戊烯中. 这需要加热到大约40°C(104°F)和大力搅拌.
• 加入蒸馏水，不断搅拌，直到最终体积为200毫升.
• 过滤器通过0灭菌.5微米(或更小)过滤器(e.g.微孔)
• 将最终溶液分装到合适的容器中——空的, 无菌采血管或带适当瓶盖的棕色注射瓶.
• 在每个容器上贴上标签:
  • 在iacuc批准的将使用TBE溶液的动物护理和使用方案上注明主要研究者的姓名
  • 化合物的名称和浓度
  • 制备红枣合剂
  • 复合有效期
• 将等价物冷藏并避光. 即使冷藏并包裹在箔纸中，TBE也能稳定长达两周.
• 笔记
• 如上所述，溶液中含有12.5 mg三溴乙醇/mL. 不要试图制造更浓缩的溶液-溶液是刺激性的，并可能导致腹膜炎和死亡的高浓度.
• 三溴乙醇降解为二溴乙醛和氢溴酸. 如果溶液的pH值小于5，则应推定其已降解.

剂量/使用

在给药之前，将容器内的内容物搅拌均匀. 该溶液通过IP注射给药，剂量为250 mg/kg体重. 诱导只需要几分钟，翻正反射返回大约40-90分钟. 手术麻醉持续15-45分钟，睡眠时间60-120分钟.

警告

不使用非无菌溶液, 过时的解决方案, 更浓的溶液, 或者比上面推荐的剂量更高. 将溶液冷藏并置于暗处. 容器应用锡纸包裹. 至少每14天更换一次冷冻的be溶液.

TBE溶液配制后不得超过14天使用.

参考文献

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动物通常在研究结束时被安乐死，以收集样本或进行死后检查. 如果动物正在经历疼痛或痛苦，它们可能会被安乐死. 安乐死被定义为无痛苦或无压力的死亡. IACUC已经批准了一些符合安乐死定义的人道杀害动物的方法. 该方法的适当性因物种而异，部分取决于所使用动物的实验终点. 这些指导方针改编自 AVMA动物安乐死指南:2013年版.

动物只能通过iacucc批准的动物使用和护理协议中描述的方法实施安乐死. 安乐死方法的改变, 包括剂量或给药途径, 是否有重大的协议变更，在实施前必须经过IACUC的审查和批准.

圣达菲医院常用的标准安乐死方法. 博彩平台大全

以下是对已确定的物种的一套可接受的标准安乐死方法. 如果您对这些方法的使用有任何疑问或希望接受培训，请联系动物园经理.

老鼠和大鼠

• 二氧化碳₂)窒息(见下面的说明)
• Sodium Pentobarbital: 100 or > mg/kg IV, IP
• 麻醉动物的斩首或颈椎脱臼(麻醉细节必须在批准的动物护理和使用方案中规定)

两栖动物和鱼类

• Sodium Pentobarbital: 100 or > mg/kg IV, ICL
• 甲烷磺酸三卡因(MS-222): 3g /升(用碳酸氢钠缓冲水浴)

缩写

• IP =腹腔内
• 静脉注射
• ICL =颅内

一氧化碳的使用说明₂ 啮齿动物安乐死协会

一氧化碳的标准燃烧室₂ 窒息是一个干净的，空的10加仑鱼缸. 的有限公司₂ 室位于ISELF 316, vivarium手术套件的术后室.

1. 将将要实施安乐死的老鼠从它们的家庭笼子转移到一个鞋盒式的笼子里. 在笼的顶部放置一个铁丝条盖子，并将整个笼放入CO中₂ 室 OR 将准备实施安乐死的大鼠从笼子直接转移到实验室内.
   • 只有同一物种的动物才能一起被安乐死.
   • 不要预先用一氧化碳填充腔室₂!

2. 将不锈钢盖子放在CO的顶部₂ 确保连接盖子和CO的透明柔性聚氯乙烯管(软管)₂ 调节器安全地连接到调节器和腔盖上.
3. 打开CO₂ 将油箱顶部的金属调节阀逆时针旋转几圈. 请勿转动标有“安乐死公司”的黑色阀门。. 这是调整CO速率的调节器₂ 进入房间. 根据腔室的尺寸预先确定了该值，并相应地设置了阀门.
4. 两个表盘压力表安装在空气流量调节器的顶部. 检查右侧压力表上显示的值(以psi为单位)-这是CO中剩余气体的压力₂. 当气体开始流入腔室时，该值应至少为200.
   如果大于200，继续执行步骤6. 如果小于200，则停止. 不要试图对动物实施安乐死. 从腔室取下盖子，并立即联系饲养中心经理更换水箱.

5. 允许有限公司₂ 气体进入腔室至少10分钟. 在此期间，请不要以任何理由将盖子从舱内拆下. 在CO附近有一个白色的小定时器₂ 设置为10分钟，然后按下大的开始/停止按钮. 在10分钟过去之前，不要以任何方式扰乱房间.
6. 关闭CO₂ 顺时针旋转金属调节旋钮，直到停止. 取决于油箱中剩余的气体量, 你可能需要等待几分钟，直到气体停止流动.
7. 打开密室的盖子，确认里面所有的动物都死了.

完全安乐死的验证是 强制性的

动物没有死，如果:

• 它的心脏在跳动. 用你的拇指和食指来感受胸部.
• 当你触摸眼球时，它会闪烁.

如果动物没有死, 把它放回枪膛, 并开始上述第二步的安乐死程序.

注:新生儿和胎儿 是否对二氧化碳安乐死有抵抗力. 参见美国国立卫生研究院指导啮齿动物胎儿和新生儿的安乐死.

建议以下指导方针，以协助美国国立卫生研究院的动物护理和使用委员会审查涉及使用啮齿动物胎儿或新生儿的提案. 在所有情况下, 实施安乐死的人必须经过适当程序的全面培训.

AVMA动物安乐死指南, 2013年版指出，“科学数据表明，哺乳动物胚胎和胎儿在怀孕和分娩期间处于无意识状态.它还指出，“早熟的豚鼠幼崽在怀孕的75%到80%之前都没有知觉和意识，并且由于化学抑制剂直到出生后都没有意识”，“胚胎和胎儿不能有意识地体验呼吸困难或疼痛等感觉。. 因此, 在大坝死亡后，他们也不能在子宫内死亡, 不管是什么原因.”¹

胎儿

1. 小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠胎儿的出生: 最近的证据表明，胎儿在出生前既没有知觉也没有意识，因此无法真正感知疼痛.^1,4,5,6 当胎儿(小鼠，大鼠) & hamster > E15, or Guinea pigs > E35) are required for study, 个别胎儿的安乐死可采用手术剪刀斩首或颈椎脱臼等可接受的物理安乐死方法. 另外, 如果母亲按照下面“b”的描述被安乐死, 带着幼崽的子宫或羊膜囊完整的幼崽可以从坝上移除. 然而，胎儿死亡需要一个小时或更长时间.¹ If, 在任何时候, 允许胎儿呼吸, 他们必须被斩首或颈部脱臼. 当整个胎儿需要化学固定时, 胎儿应该在浸泡之前实施安乐死, 或者灌注, 固定剂的解决方案. 胎儿体温过低可有效诱导麻醉, 将胎儿(羊膜囊完整)浸泡在低温(4-8⁰C/35-39⁰F)生理盐水中，直到胎儿完全无法移动，这可以实现吗.
2. 当胎儿不需要研究时, 孕妇选择的安乐死方法应确保胎儿快速缺氧，对子宫环境的干扰最小，使胎儿觉醒最小化.5 .母亲安乐死的推荐方法是CO₂ 暴露之后是第二种安乐死方法, 其中可能包括颈椎脱位, 斩首或双侧气胸. 必须在安乐死之后和处置之前核实母亲的死亡情况. 应咨询研究所兽医考虑其他安乐死药剂.

新生儿(有呼吸的新生动物)

痛觉感受器的成熟和兴奋性和抑制性受体系统的发育发生在出生前到出生后的第二周.^7-11 这个年龄对缺氧的抵抗导致昏迷时间延长₂ 是否用作安乐死剂.^1,3,12 建议采用第二种物理安乐死方法来确保死亡.g. 颈椎脱位、断头、双侧气胸). 必须在安乐死后和处置前核实死亡.¹¹

1. 鼠标, 老鼠, 10天大的新生儿:可接受的安乐死方法包括:注射化学麻醉剂.g.(戊巴比妥)、斩首或颈椎脱位. Additionally, these animals are sensitive to inhalant anesthetics; e.g., CO2, 或2异氟醚从蒸发器(使用时考虑适当的安全因素)，尽管长时间暴露, 长达50分钟¹，可能是必要的. 建议采用第二种物理安乐死方法来确保死亡.g. 颈椎脱位、断头、双侧气胸). “胎儿 that are believed to be unconscious and altricial neonates < 5 days of age ... 会在液态N2中迅速冻结而迅速死亡吗.”¹ 适用于5天或以上的新生儿, 只有在麻醉前才可以用液氮浸泡. Anesthesia may be induced by inhalant or injectable anesthetics; the institute veterinarian should be consulted for appropriate agents and dosages. 另外, 在充分证明的情况下, 低温可用于6日龄或更短的幼犬(但3-4日龄更为典型)的麻醉。.^13,14,15

2. 新生豚鼠:遵循成人指南.¹
3. 10日龄以上的小鼠、大鼠和仓鼠 遵循成人指南.¹

参考文献

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以下是对MS-222溶液配制人员的安全指导, 给非洲爪蟾适当的剂量, 以及MS-222溶液的处理程序. 所有用于动物麻醉或安乐死的MS-222必须得到St的批准. 博彩平台大全IACUC. 以下描述的所有活动必须由iacucc批准的动物使用协议中指定的首席研究员(PI)或共同PI(s)进行. 在没有这些人的情况下, 只有IACUC的主治兽医或青蛙来源的动物设施的管理人员才能进行这些活动.

安全预防措施

iacuc批准的动物使用协议要求使用MS-222, PI负责确保从事任何涉及暴露于MS-222的青蛙的动物使用活动的人员和学生安全使用该化合物. 使用MS-222的人员应熟悉该化合物的安全数据表(SDS), 哪些是本文件的附录. MS-222对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性.

MS-222溶液应在通风柜中配制，以尽量减少吸入其粉末形式的风险. 在处理MS-222粉末时，必须始终戴上检查手套, 化合物在任何浓度下的水溶液, 或接触过MS-222的动物. 平衡, 刮刀, 烧杯或其他用于制备MS-222溶液的实验室设备和材料必须在制备溶液的个人使用后立即彻底清洁.

MS-222溶液的制备和使用

只有超纯去离子水才能用于制备MS-222溶液. 去离子水可在生物储藏室(WSB 281)或从任何一个去离子水水龙头位于整个isself大楼(e.g.， ISELF 320-330集成研究套件).

MS-222溶液必须在用于麻醉或安乐死的当天新鲜制备. 没有例外. 因为MS-222能使溶解它的水酸化, 所有MS-222溶液必须缓冲至pH值为7.使用前用碳酸氢钠稀释. 每天只准备所需的MS-222溶液.

麻醉和安乐死指南

有关麻醉和安乐死的详细信息，请参阅批准 MS-222(三卡因甲磺酸盐)用于非洲爪蛙麻醉和安乐死的制备和使用指南 

MS-222溶液的处理

所有MS-222溶液必须在配制当天丢弃. MS-222溶液不能使用超过一天.

以上述任一浓度制备的MS-222溶液可通过卫生下水道丢弃. 在水池边, 打开水龙头上的两个阀门(自来水的最大流量)，将MS-222溶液慢慢倒入水槽，使溶液用大量的水冲洗.

引用: 

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